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某些細(xì)菌在其發(fā)育的一定階段可以形成一個(gè)內(nèi)生孢子,即為芽孢.芽孢形成后并不脫離原細(xì)菌菌體,它的形狀、大小和在菌體的位置都是一定的.老熟的芽孢可自菌體中脫落出來.芽孢結(jié)構(gòu)上的特點(diǎn)是壁厚和細(xì)胞質(zhì)濃厚,所以不易著色,通常多采用著色力強(qiáng)的染色劑和用加熱等手段促使芽孢著色,并利用復(fù)染的方法對(duì)比原細(xì)菌菌體和芽孢,才易于在顯微鏡下看到它們.但是,若用簡(jiǎn)單染色法使菌體著色而芽孢無色也可以襯托出芽孢的形狀、大小和位置.
【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/div>
掌握細(xì)菌芽孢染色的方法.
【實(shí)驗(yàn)原理】
細(xì)菌的芽孢含水量少,脂肪含量高,芽孢壁較厚,對(duì)染料的透性差,不易著色,但是一旦著色又難以脫色.
通常,芽孢染色采用弱堿性染料孔雀綠在加熱的條件下進(jìn)行.染色完畢,用蒸餾水沖洗.因孔雀綠是弱堿性染料,與菌體結(jié)合力較差,因此易被水沖洗掉,而進(jìn)入芽孢的孔雀綠卻難于溶出.水洗后,再用一種呈紅色的堿性染料復(fù)染,使菌體和芽孢呈現(xiàn)不同顏色.
【實(shí)驗(yàn)材料、藥品及器具】
1、菌種 枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)巨大芽孢桿菌(Bacillus megaterium)
2、染液 孔雀綠染液
藏花紅染液
3、器皿 顯微鏡、酒精燈、鑷子、洗凈的載玻片4 片、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙、玻璃紅、洗瓶裝蒸餾水、接種環(huán).
【實(shí)驗(yàn)步驟】
1、取培養(yǎng)24h左右的枯草芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌分別涂片、干燥、固定.
2、在涂片部分用吸水紙條蓋住,然后向紙條滴加孔雀綠液至飽和.
3、將涂片逐漸加熱至微冒蒸汽并不時(shí)添加染液以防止吸水紙條干燥.染色
2-8 分鐘.
4、除去吸水紙條,用蒸餾水輕輕沖洗掉多余染液.
5、用藏花紅染液復(fù)染30~60S.
6、水洗,風(fēng)干或烘干后鏡檢.
【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】
1、首先用低倍鏡,再用油浸鏡檢查制片,注意芽孢的顏色和菌體的顏色.
2、繪制芽孢圖.注意芽孢在菌體內(nèi)的位置、大小和形狀并繪制游離芽孢形態(tài)圖.
【思考題】
1、為什么經(jīng)孔雀綠染色后,水洗再復(fù)染紅色染液只能染上菌體?
2、用革蘭氏染色能否看到芽孢,為什么?
編輯：songjiajie2010
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細(xì)菌芽孢染色
