一、目的

掌握還原糖和總糖測(cè)定的基本原理，學(xué)習(xí)比色法測(cè)定還原糖的操作方法和分光光度計(jì)的使用。

二、原理

還原糖的測(cè)定是糖定量測(cè)定的基本方法。還原糖是指含有自由醛基或酮基的糖類，單糖都是還原糖，雙糖和多糖不一定是還原糖，其中乳糖和麥芽糖是還原糖，蔗糖和淀粉是非還原糖。利用糖的溶解度不同，可將植物樣品中的單糖、雙糖和多糖分別提取出來，對(duì)沒有還原性的雙糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有還原性的單糖進(jìn)行測(cè)定，再分別求出樣品中還原糖和總糖的含量（還原糖以葡萄糖含量計(jì)）。

還原糖在堿性條件下加熱被氧化成糖酸及其它產(chǎn)物，3,5-二硝基水楊酸則被還原為棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸。在一定范圍內(nèi)，還原糖的量與棕紅色物質(zhì)顏色的深淺成正比關(guān)系，利用分光光度計(jì)，在540nm波長下測(cè)定光密度值，查對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算，便可求出樣品中還原糖和總糖的含量。由于多糖水解為單糖時(shí)，每斷裂一個(gè)糖苷鍵需加入一分子水，所以在計(jì)算多糖含量時(shí)應(yīng)乘以0.9。


 

三、實(shí)驗(yàn)材料、主要儀器和試劑

1. 實(shí)驗(yàn)材料

小麥面粉；精密pH 試紙。

2. 主要儀器

（1）具塞玻璃刻度試管：20mL×11

（2）大離心管：50mL×2

（3）燒杯：100mL×1

（4）三角瓶：100mL×1

（5）容量瓶：100mL×3

（6）刻度吸管：1mL×1；2mL×2；10mL×1

（7）恒溫水浴鍋

（8）沸水浴

（9）離心機(jī)

（10）扭力天平

（11）分光光度計(jì)

3. 試劑

（1）1mg/mL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液

準(zhǔn)確稱取80℃烘至恒重的分析純葡萄糖100mg，置于小燒杯中，加少量蒸餾水溶解后，轉(zhuǎn)移到100mL 容量瓶中，用蒸餾水定容至100mL，混勻，4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/div>