高效液相色譜儀的儀器本身是記錄樣品通過檢測器時,吸光度的變化而產(chǎn)生的電信號變化,從而產(chǎn)生色譜譜圖,最終的結(jié)果就要靠后期的色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。
譜圖處理完即可制作校正曲線,校正曲線是數(shù)據(jù)處理的重點,是將標(biāo)樣譜圖的信息與數(shù)據(jù)做成一個標(biāo)準(zhǔn),供處理試樣譜圖使用。校正是通過分析指定的準(zhǔn)備好的標(biāo)準(zhǔn)樣品,來確定計算絕對組分濃度的響應(yīng)因子的過程。接下來介紹常用的數(shù)據(jù)處理方法:
外標(biāo)法
外標(biāo)法是指添加一定量的標(biāo)準(zhǔn)品于空白樣品中制成對照樣品,與未知檢測樣品平行進行樣品處理并檢測,根據(jù)對照品響應(yīng)值與標(biāo)準(zhǔn)品的濃度函數(shù)關(guān)系計算出未知檢測樣品中被測組分濃度的定量方法。
內(nèi)標(biāo)法
內(nèi)標(biāo)法指的是將一定重量的純物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)物加到一定量的被測樣品混合物中,然后對含有內(nèi)標(biāo)物的樣品進行色譜分析,分別測定內(nèi)標(biāo)物和待測組分的峰面積及相對校正因子,按公式計算出被測組分的含量。
兩種數(shù)據(jù)處理方法的區(qū)別
內(nèi)標(biāo)法是把標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)加入到被測樣品中,外標(biāo)法不是把標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)加入到被測樣品中,而是在與被測樣品相同的色譜條件下單獨測定。 1、外標(biāo)法要求儀器重復(fù)性很嚴(yán)格,適于大量的分析樣品,因為儀器隨著使用會有所變化,因此需要定期進行曲線校正。此法的特點是操作簡單,計算方便,不需測量校正因子,適于自動分析。但儀器的重現(xiàn)性和操作條件的穩(wěn)定性必須保證,否則,會影響實驗結(jié)果。 2、內(nèi)標(biāo)法要求挺嚴(yán)格的,對于內(nèi)標(biāo)物的選擇要有一定的原則,適于分析樣品量較少的情況;不要求樣品里的所有組分都出峰,只要內(nèi)標(biāo)物和所關(guān)注的組分出峰并分離好就可以了;定量準(zhǔn)確,對進樣量和操作條件的控制不很嚴(yán)格,但必須準(zhǔn)確稱量試樣和內(nèi)標(biāo)物,否則會影響實驗結(jié)果·。